Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Возрастные особенности репаративной регенерации печени при трансплантации гепатоцитов и действии метаболически активных факторов

Возрастные особенности репаративной регенерации печени при трансплантации гепатоцитов и действии метаболически активных факторов - тема автореферата по медицине

АВТОРЕФЕРАТ

Возрастные особенности репаративной регенерации печени при трансплантации гепатоцитов и действии метаболически активных факторов - диссертация, тема по медицине

ДИССЕРТАЦИЯ Реутов, Андрей Александрович Екатеринбург 2004 г.

Ученая степень: кандидат медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Возрастные особенности репаративной регенерации печени при трансплантации гепатоцитов и действии метаболически активных факторов

На правах рукописи

РЕУТОВ Андрей Александрович

ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ РЕПАРАТИВНОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ ПЕЧЕНИ ПРИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕПАТОЦИТОВ И ДЕЙСТВИИ МЕТАБОЛИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ФАКТОРОВ

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Екатеринбург - 2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионально образования «Уральская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерацию)

Научный руководитель- Член-корреспондент РАМН

Заслуженный деятель науки РФ доктор медицинских наук, профессор Ястребов Анатолий Петрович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Осипенко Артур Васильевич

доктор медицинских наук, профессор ЕникеевДамир Ахмегович Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации» (г. Челябинск, ул.Воровского, 16)

Защита диссертации состоится «27» декабря 2004 года, в «_» часов на заседании

диссертационного совета К 208.102.02 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Уральская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации» по адресу: 620028, г. Екатеринбург, ул. Репина, 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государе гвешюго образовательного учреждения высшего профессионального образования «Уральская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации»

Автореферат разослан «27» ноября 2004 года

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор медицинских наук

профессор Базарный В.В.

00 4 -tf /7 Л ^-rm <?

Актуальность проблемы Восстановление функциональной активности (A.-K.Hassan, R.Sadovsky, 2000) печени при её поражениях различной этиологии (Д.С.Саркисов, В.Н.Галанкин, 1971; И.Н.Яшина, 1971) представляет трудную задачу современной гепатологии и терапии. В ряде случаев требуется не просто смена, а восполнение и обновление утраченных структурно-функциональных единиц органа (А.П.Ястребов, А.В.Осипенко, 1990). Не равноценность морфологического и функционального восстановления печени (ДС.Саркисов, В.П.Туманов, 1990; А.П.Ястребов, 1993; I.Uryvaeva, G.Delone, 1995) порой сводит на нет все материальные затраты на лечение больных с печеночной патологией, а также приводит к развитию вторичных компенсаторных деформаций гистологической структуры печени (G.Galanti, 1962), в дальнейшем способствуя развитию портальной гипертензии и вторичному перерождению печени (R.Sadovsky et al., 2000). С возрастом эти изменения приобретают характер стойких. Данные изменения способствуют снижению качества жизни больных посредством уменьшения секреторной, экскреторной и дезинтоксикационной функций печени, нередко являясь причиной формирования упорных болей в брюшной полости человека, снижая его трудоспособность и приводя к инвалидности. В современной медицине проблеме заболеваний печени уделяется достаточно большое внимание в связи с неуклонным ростом числа поражений печени у лиц активного репродуктивного возраста (А.С.Логинов, Л.И.Аруин, О.Л.Шаталова, 1986), с дальнейшей тенденцией к прогрессирующему течению (A.-K.Hassan, 2000), нередко с формированием в исходе цирроза и первичного рака печени (H.Popper, W.Orr, 1970; В.М.Фактор, 1985).

Повреждение гепатоцитов при гепатитах различной этиологии индуцирует развитие регенераторных процессов в печени (A.H.Islami, G.T.Pack, 1966; S.Sherlock, P.J.Scheuer, 1973; C.J.Vessey, 2001). Причины, обусловливающие в каждом конкретном случае выраженность

регенераторных процессов, "ущга-тпчт весьма

РОС НАЦИОНАЛЬНАЯ

важное значение в изучении этой пробт^щцц^ищрежи опытам на

животных. Увеличение за последнее десятилетие количества экспериментальных исследований, посвященных проблеме репаративной регенерации печени в условиях экстремальных воздействий на организм (Э.И.Гальперин, С.Р.Карагюлян, О.Ю.Абакумова и др. 1985; М.В.Северин, Б.Г.Юшков, А.П.Ястребов, 1993; M.Alison, 1986; G.Ramadori, Т.Armbrust, 2001), обогащаясь новыми методиками, позволяют более полно осветить данную проблему (K.L.Streetz, T.Wustefeld, C.Klein et al., 2001), свидетельствуя о высокой актуальности её изучения.

Несмотря на значительные успехи гепатологии, достигнутые за последние десятилетия (В А.Вишневский и др., 1993; P.L.O'Neill, P.L Blanc et al., 1984; S.Kubo, I.Matsui-Yuasa et al., 1987; R.P.Cornell, B.L.Liljequist, K.F.Bartizal, 1990), в проблеме коррекции функциональной активности печени у больных разного возраста также сохраняются нерешенные аспекты. Анализ научной литературы показывает, что традиционным методом лечения патологии печени продолжает оставаться симптоматическое назначение монопрепарата направленного на коррекцию функций печени (M.Usami, Y.Saitoh, 1997).

К настоящему времени достаточно хорошо изучены некоторые морфофункциональные аспекты репаративной регенерации печени (В.В.Подвысоцкий, 1886; В.Ф.Сидорова, 3 А Рябинина, 1960; M.Alison, 1986; N.Fausto, E.M.Webber et al., 1994; I.V.Uryvaeva, G.V.Delone, 1995). Большинство таких исследований выполнено в эксперименте на животных молодого возраста и часто содержат противоречивые данные. В частности, ряд авторов считает, что в постнатальном развитии увеличивается число полиплоидных клеток и снижается митотическая активность гепатоцитов (Т.Н.Копылова, А .Я Майоре и др , 1983; S Sherlock, P.J.Scheuer et al., 1973). Другие исследователи с увеличением возраста выявили активацию пролиферативных процессов в печени (М В Кудрявцева, А В.Емельянов и др., 1998), стимуляцию митотической активности и нарастание полиплоидизации печеночных клеток (Г И.Кодолова, 1987; Д.С.Саркисов,

B.П.Туманов, 1990; М.В Северин, Б.Г.Юшков, А.П.Ястребов, 1993; И.В.Урываева, Г.В.Делоне и др., 1991).

Данные А.Г.Бабаевой (1998) о переносе лимфоцитами «регенерационной информации» расширили наши представления о её механизмах, однако такая информация активна лишь в течение нескольких часов после повреждения печени. Работами сотрудников лаборатории кафедры патофизиологии Уральской государственной медицинской академии установлено, что в процессе регенерации печени после частичной гепатэктомии происходят фазовые изменения полиплоидизации, митотической и функциональной активности гепатоцитов взрослых животных (Г.И.Кодолова, 1982 и др.;

C.В.Цвиренко, 1994, М.В.Северин, 1999,). Однако многие вопросы регуляции регенераторных процессов, особенно у зрелых и старых животных, не были предметом исследования, не была определена роль отдельных механизмов воздействующих на регенерацию в эти периоды. О важности изучения этой проблемы указано в работах В.Ф.Сидорова и др., 1960; Т.Н.Копылова и др., 1983; М.В.Кудрявцева и др., 1998; S.Sherlock et al., 1973; M.AHson, 1986; N.Fausto et al., 1994; l.V.Uiyvaeva. et al., 1995.

Следует особо подчеркнуть, что репаративные процессы могут развиваться на фоне воздействия токсических (химических) факторов. Между тем, вклад этих процессов в восстановление утраченных функций органов и тканей остаётся дискуссионным.

Можно также предположить, что в этих условиях трансплантация гепатоцитов интактных животных будет служить дополнительным стимулом для поддержания регенераторных процессов в печени. Однако таких исследований не проводилось. Остаются неясными механизмы воздействия ряда метаболически активных факторов в регулировании регенераторных процессов печени, особенно при комбинированном их применении. Отсутствуют сведения о роли таких препаратов при регенерации печени в условиях её механического и токсического повреждения, а также влияния трансплантации гепатоцитов. которые при этой патологии в зрелом и старом

возрасте не исследованы. Специальный интерес представляет вопрос о роли функционального состояния гепатоцитов на процессы регенерации печени в экстремальных условиях, а также оказывает ли влияние на этот процесс возраст испытуемых животных.

Цель работы: Изучить особенности течения регенераторных процессов в печени зрелых и старых животных после частичной гепатэктомии и токсического повреждения на фоне воздействия метаболически активных факторов и трансплантированных старых гепатоцитов.

Задачи исследования.*

1. Исследовать морфофункциональное состояние печени и регенераторные процессы в физиологических условиях и при частичной гепатэктомии у зрелых и старых животных, а также при введении МАФ.

2. Исследовать регенераторные процессы и функциональную активность печени при воздействии четырёххлористого углерода у зрелых и старых животных.

3. Исследовать регенераторные процессы и функциональное состояние печени при трансплантации гепатоцитов старых животных интактным животным и после частичной гепатэктомии.

4. Исследовать регенераторные процессы в печени при трансплантации печёночных клеток животным с повреждённой печенью и действием метаболически активных факторов.

Научная новизна

Показано, что морфо-функциональное состояние интактной печени у зрелых и старых животных характеризуется одинаковьми значениями показателей клеточной пролиферации и высокой функциональной активностью, особенно дез интоксикационной функции.

Впервые установлено, что после частичной гепатэктомии активируются механизмы регенерации одновременно со снижением дезинтоксикационных реакций у зрелых и старых животных. Введение метаболически активных веществ оказывает выраженный стимулирующий эффект на регенерацию и ицдуцирует белково-синтетическую функцию печени у обеих групп животных. Обнаружено, что при гепатотоксическом действии ССЦ значительно снижается пролиферативная активность печеночных клеток. Одновременное проведение частичной гепатэктомии приводит к выраженному замедлению регенерации у зрелых и старых животных. Дополнительное введение метаболически активных веществ восстанавливало регенерационный потенциал и функциональную активность печени, более выраженную у старых животных.

Впервые найдено, что трансплантация гепатоцитов старых животных реципиентам с частичной гепатэктомией стимулирует пролиферацию печени у зрелых и старых животных. В условиях токсического воздействия ССЦ трансплантация клеток печени способствует сохранению её репарационных возможностей. Введение метаболически активных веществ усиливает положительный результат трансплантации особенно в группе старых животных.

Практическая значимость работы

Выполненная работа показала, что старые животные, также как и зрелые, обладают высокой способностью к регенерации. При экстремальных воздействиях на организм в условиях гепатэктомии и введения ССЦ сохраняется высокий регенерационный потенциал, а применение метаболически активных веществ способствует его активации, существенно снижая негативные последствия токсического повреждения гепатоцитов.

Высокая эффективность трансплантации гепатоцитов животным-реципиентам с различным морфо-функциональным состоянием печени, а также введение им метаболически активных веществ (особенно в группе

старых животных) открывают перспективы для обоснования использования этого метода в клинической практике. Его дальнейшая разработка позволит найти эффективный путь коррекции тяжелых заболеваний печени в зрелом и старческом возрасте, сопровождающиеся снижением регенерации.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования используются при обучении студентов на кафедрах «Патологической физиологии» и «Нормальной физиологии» Уральской государственной медицинской академии. Результаты данных исследований используются в ГКБ г.Екатеринбурга для прогностической оценки нарушений функциональной активности печени при заболеваниях различного генеза.

Апробация работы и публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на 56 научных конференциях молодых ученых и студентов УрГМА «Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения» (Екатеринбург, 2001) и на Межобластной научно-практической конференции «Геронтология. Гериатрия. Медицинская помощь ветеранам войн» (Екатеринбург, 2001).

Положения, выносимые на защиту.

1. Частичная гепатэктомия активирует механизмы регенерации одновременно со снижением дезинтоксикационной функции у зрелых и старых животных. Введение метаболически активных веществ оказывает стимулирующий эффект на регенерацию и индуцирует белково-синтетическую функцию печени у обеих групп животных.

2. Гепатотоксическое действие ССЦ приводит к значительному снижению пролиферации печеночных клеток. Последние сохраняются и в условиях частичной гепатэктомии. Применение метаболически активных

веществ восстанавливает функциональную активность и регенерационный потенциал, особенно у старых животных.

3. Трансплантация гепатоцитов старых животных реципиентам с частичной гепатэктомией стимулирует пролиферативные механизмы в печени. В условиях одновременного воздействия СС1( трансплантация гепатоцитов способствует сохранению репаративных возможностей печени. Метаболически активные вещества усиливают положительный эффект трансплантированных гепатоцитов особенно у старых животных.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, трёх глав собственных исследований, общего заключения, выводов, списка использованной литературы, включающего 74 отечественных и 98 иностранных источников. Работа изложена на страницах, иллюстрирована 25 таблицами и 10 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объект исследования.

Исследование проведено на 288 белых крысах линии «Вистар» Эсперименты выполнены на двух возрастных группах животных:

1. Зрелые животные (144) массой 305,0±15,3 грамм, возраст 1-1,2 года.

Схема эксперимента представлена в таблице 1.

Таблица 1.

Распределение животных по сериям опытов.

Первая серия Зрелые животные Старые животные

Интактные 12 12

Воздействие метаболически активными факторами (МАФ) 12 12

Выполнялась операция частичная гепатэктомия (ЧГЭ) 12 12

Выполнялась ЧГЭ и воздействие МАФ 12 12

Вторая серия Зрелые животные Старые животные

Воздействие четырёххлористым углеродом (СС14) 12 12

Воздействие ССЦ и МАФ 12 12

Воздействие СС14 и выполнение ЧГЭ 12 12

Воздействие ССЦ, выполнение ЧГЭ и воздействие МАФ 12 12

Третья серия Зрелые животные Старые животные

Трансплантация гепатоцитов (Тр) 12 12

Выполнялась ЧГЭ и Тр 12 12

Выполнялась ЧГЭ, Тр и воздействие МАФ 12 12

Воздействие ССЬ, выполнение ЧГЭ, Тр и воздействие МАФ 12 12

Методы экспериментального воздействия

Во всех экспериментах использовали комплекс метаболически активных факторов (МАФ) - рибоксин (40 мг/кг), эуфиллин (25 мг/кг), панангин (200 мг/кг). Выбор доз препаратов основан на исследованиях других авторов (Р.Ф.Альтшулер, 1960, В В.Гацура, А.С Саратиков, 1977; М.В.Северин, 1993; В Э Колла, Б Я Сыропятов, 1998), которые являются средними терапевтическими дозами для данного вида животных Данные препараты

вводили медленно, последовательно в хвостовую вену животных, с 20 до 21 часа, используя специальную фиксирующую клетку для животных данного вида за 12-12,5 часов до забоя (T.Matsunaga, E.Gohda, T.Takebe et a!., 1994).

Индукцию регенерации печени у экспериментальных животных вызывали частотной гепатэктомией (ЧГЭ) (75% массы) по методу J.M.Higgins, R.E Anderson (1931). Такая методика использовалась в ранее выполненных исследованиях (С В.Цвиренко, 1979; М.В.Северин, Г.И.Кодолова, 1987). Все оперативные манипуляции производили соблюдая правила асептики Все оперативные вмешательства производились с 8 до 10 часов. Через 24 часа после ЧГЭ, когда синтез ДНК достигал своего пика (D.G.Johnston, G A Johnson, K.G.Alberti, G.H.Millvvard-Sadler et al., 1986; C.F.Cesarone, L Scarabelli, A.I.Scovassi, R.Izzo, M.Menegazzi, A.Carcereri De Prati, M.Orunesu, U.Bertazzoni, 1990), животных забивали и получали органы для исследования. Эвтоназию животных проводили ингаляционной передозировкой эфира.

Токсическое поражение печени вызывали путём однократного, внутрибрюшинного введения масленого раствора четырёххлористого углерода в дозе 0.8 гр/кг массы животного. Данное количество СС14 является максимально переносимым для белых крыс (Е.Я.Арзяева, 1966; JI Ф.Виноградова и др., 1989), при котором животные получали тяжелое поражение печени. Последующие экспериментальные воздействие выполнялись через 24 часа.

Гепатоциты из печени крыс выделяли с 17зп до 1930 часов ферментативным способом по методике, разработанной в лаборатории «Перфузии и криоконсеррирующих сред» НИИ трансплантологии и искусственных органов г Москвы (зав лаб проф Н.А Онищенко). Клеточность и жизнеспособность выделенных гепатоцитои подсчитывали в камере Горяева после их окраски 3 % трипановым синим, по общепринятой методике. Жизнеспособность трансплантируемых гепатоцитов составляла 95% и выше Трансплантация реципиентам проводилась в количестве

примерно 107 донорских клеток на 250 грамм массы тела реципиента, внутрибрюшинно с 20 до 21 часа, за 12-12,5 часов до забоя животных

Лабораторные исследования

Для гистологического исследования полученные фрагменты печени фиксировали в формалине, затем окрашивали гематоксилином и эозином. Подсчёт плоидности клеток и числа митозов проводили с помощью сетки Автандилова, результат выражали на 1 ООО клеток.

Определение содержания РНК и ДНК в печёночных клетках. Разделение и очистку нуклеиновых кислот производили по методу Y.Schmidt, S.J.Thannhauser (1945) с модификацией A.Fleck, H.H.Munro (1962). Количественное определение нуклеиновых кислот проводили спектрофотометрическим методом (Р.Г.Цанев, Г.Г.Марков, 1960) на спектрофотометре СФ-4А в кювете толщиной 10 мм. Образцы РНК фотометрировали при 260 и 286 нм, ДНК - 268 и 284 нм. Содержание нуклеиновых кислот в исследуемом образце ткани рассчитывали по формулам:

РНК= 561(s260 - s286) * V * R мг % фосфора нуклеиновой кислоты W*1

ДНК= 800(е268 - е284) * V * R мг % фосфора тгуклеиновой кислоты, W * 1

где V - обьём экстракта в мл, R - разведение образца, W - вес взятой в определение ткани (мг), 1 = i - толщина кюветы в см (Р.Г.Цанев, Г.Г.Марков, 1960).

Для перехода от количества фосфора нуклеиновых кислот к количеству нуклеиновых кислот использовали метод Спирина A.C. (1958). Содержание нуклеиновых кислот в ткани выражали в мг на 1 г массы печени.

Для определения функциональной активности печени использовалась гексеналовая и бромсульфалеиновая пробы. Гексеналовая проба заключалась во внутрибрюшинном введении животным перед забоем гексенала (бОмг/кг) и учете длительность сна животных (Е.Я Арзяева, 1966; Э Н.Баркова, О.В.Гуров, 1995).

Нагрузка бромсульфалеином, предложенная Rosental, White (1925), использовалась в модификации Израйлета Л.И., Соминского В.II. (1976) фотометрическим способом на фотометре фотоэлектрическом КФК-3 на ^=582нм Концсшрацшо бромсульфалеина в крови и в гомогенате печени определяли по калибровочной кривой, по методу Тугариновой В.Н., Миклашевского (1966)

Биохимические показатели крови и печени.

В работе исследовались следующие биохимические показатели: аланинаминотрансферраза (AJIAT) крови и печени, аспартатаминотрансферраза (АСАТ) крови и печени, общий белок крови и печени, а также щелочная фосфатаза (ЩФ) и мочевина крови.

Определение AJ1AT, АСАТ и ЩФ проводилось на селективном биохимическом анализаторе Specific Basic, фирмы «Коне» Финляндия, на базе биохимической лаборатории ГФУН УНИИТО им.В.Д.Чаклина, оптимизированным кинетическим методом с использованием фирменных наборов реактивов и материалов. Общий белок определяли унифицированным методом по биуретовой реакции (В.В.Меньшиков, Л Н Делекторская, 1972). Мочевину сыворотки крови определяли унифицированным методом по цветной реакции с диацетилмонооксимом (Л Н.Делекторская, 1987) с помощью набора фирмы «LACHEMA» Чехословакия на базе клинической лаборатории ГФУН УНИИТО им.В Д.Чаклина

Для биохимического анализа печеночной ткани использовали приготовление гомогената печени по методу Осадчей Л.М, Прохоровой М.И. (1982). В надосадочной жидкости определяли общий белок описанным выше

способом, результат выражали в г/л с учётом всех разведений. Для определения активности трансаминаз с учётом закона Ламберта-Бэра надосадочную жидкость гомогената ткани печени разводили в 200 раз, после чего определяли активность AJ1AT, АСАТ описанным выше способом. Результаты выражали в ED/л с учётом всех разведений. Показатели общего анализа крови.

Общий анализ крови включал следующие показатели: эритроциты, гемоглобин, лейкоциты, лейкоцитарную формулу, СОЭ, показатель гематокрита.

Радиоизотопные методы исследования клеток печени.

Активность синтеза белка в печени определяли с помощью DL-23H-лейцина (129 ТБк/моль), вводимого внутрибрюшинно в количестве 0,5 мл на 100 грамм массы тела экспериментальных животных за 80 минут до забоя и активность синтеза нуклеиновых кислот - с помощью метил-3Н-тимидина (820 ТБк/моль), вводимого аналогично. Степень включения донорских клеток в печень реципиента, дополнительно оценивалась с помощью предварительной инкубации трансплантируемых клеток с 2|4С-оротовой кислотой (2090 ГБк/моль). Радиоизотопные методы исследования проводились на базе Радиоизотопной лаборатории ЦНИЛ УрГМА под руководством проф. О.Г.Макеева. Статистический анализ полученных данных.

Статистическая обработка полученных данных осуществлялась при помощи персонального компьютера с помощью коэффициента Стьюдента с использованием программы Microsoft Excel 200 и статистической программы «Статистика для Windows».

Результаты собственных исследований и их обсуждение.

Морфо-функциональное состояние интактной печени практически одинаково у зрелых и старых животных. Оно характеризуется низкими значениями клеточной пролиферации и высокими показателями

функциональной активности разной степени выраженности. Так, в физиологических условиях масса печени (148 % р<0,05) и содержание общего белка в ней (191% р<0,05) выше у старых животных, и напротив, дезинтоксикационная функция печени (БСФ=32 % р<0,05) выше у зрелых животных.

Введение МАФ зрелым животным вызывает повышение количества ДНК (176% р<0,05) печени и увеличивает количество общего белка в печени (143% р<0,05); у старых животных МАФ в большей степени активируют регенераторную (увеличение РНК и ДНК печени на 200% р<0,05) функций печени. У обеих групп животных наблюдается активация дезинтоксикационной (в 2 раза) и белково-синтетической (в 1,5 раза) функций печени, на фоне некоторых признаков повреждения гепатоцитов (увеличение 1ДФ на 150%).

В ранее выполненных работах сотрудников кафедры патофизиологии УрГМА (С.В.Цвиренко, 1977; М.В.Северин, 1993; Г.И.Кодолова, 1997; Н.Б.Крохина, 2004) детально описан характер регенераторных процессов печени в условиях ЧГЭ. Однако в подавляющем большинстве опьггы проведены на молодых и взрослых животных. В зрелом и старом возрасте исследования не проводились, что и явилось основанием для следующих экспериментов.

В условиях частичной гепатэктомии у старых животных регенерационные возможности печени были выше по сравнению со зрелыми. У них наблюдается повышение синтеза ДНК печени (по включению метил-3Н-тимидина на 200% р<0,05), происходит активация лейкопоэза, однако угнетается дезинтоксикационная функция печени, обнаруживаются признаки анемизации организма.

Число митозов в гепатоцитах зрелых и старых животных при различных воздействиях

Иктактиые жнюткые

СС14+ЧГЭШЛФ ЧГЭ)-Тр»МАФ

| Я Зрелые животные О Старые животные

Число диплоидных клеток печени у зрелых и старых

животных при различных воздействиях

Иитакткые жнкгпше

СС14 тЧГ>-МЛФ ЧГУ-Тр+МАФ

Следует отметить, что у старых животных введение МАФ стимулирует индуцированную (ЧГЭ) регенерацию печени и у обеих групп животных активирует дезинтоксикационную функцию. Следовательно, у старых животных индуцированная регенерация печени в условиях применения МАФ не уступает, а по ряду показателей превосходит её по сравнению со зрелыми животными, что свидетельствует о сохранности регенераторного потенциала печени и наличие активно действующих механизмов регулирования этих процессов в зрелом и старом возрасте.

Эта серия опытов послужила основанием для оценки таких важнейших проявлений жизнедеятельности организма как регенерация при токсических повреждениях печени. Среди многочисленных моделей её токсического повреждения мы остановились на наиболее изученной модели - введение четырёххлористого углерода. В условиях гепатотоксического воздействия СС14 происходит значительное снижение пролиферативной активности печени зрелых и старых животных. Наши данные находят подтверждение в ранее выполненных работах (Р.П.Женевская, 1954; Л.К.Романова, 1984; M.Alison, 1986; Т.В.Савченко, Ю.А.Романов, 1989; М.В.Северин, Б.Г.Юшков,

A.П.Ястребов, 1993;М.В.Кудрявцева, Г.А.Сакута и др. 1998; I.V.Uryvaeva, G.V.Delone, 1995; M.F.Chen, T.L.Hwang, H.C.Yu, 1996; J.Blanc, S.Lepreux,

B.Le Bail et al., 2000), которые отмечали аналогичный эффект, но у молодых и взрослых животных. Это может указывать на универсальность патогенетического действия этого вещества независимо от возраста. Вместе с тем, следует отметить, что у старых животных имеется тенденция к большей сохранности регенерационного потенциала. При комбинации воздействия на организм СС14 и ЧГЭ обнаружено существенное замедление регенерации печени как у зрелых, так и у старых животных, сопровождающееся нарушениями функционального состояния печени. В тоже время при таком сочетании неблагоприятных воздействий на печень (ЧГЭ+СС14) прослеживается явная тенденция меньшего повреждения гепатоцитов старых

Включение Н-леш|инз,в печень зрелых животных

, Рис.3.

Интактные животные ЧГЭ ШСС14+ЧГЭ ЧГЭ+Тр

Н СС14 +ЧГЭ+МАФ И ЧГЭ+Тр+МАФ

Включение Н-лейцина в печень старых животных 1

' Интактные животные СП ЧГЭ

С С14 +ЧГЭ ЧГЭ+Тр

ВСС14 +ЧГЭ+МАФ ОЧГЭ+Тр+МАФ

животных, что позволяет предположить о сохранении потенциальных возможностей гепатоцитов к регенерации.

В связи с этим в следующей серии опытов нами применены метаболически активные факторы у животных, подверженных воздействию СС14 в сочетании с частичной гепатэктомией. Оказалось, что МАФ восстанавливает регенерационный потенциал, улучшая синтетические процессы и функциональную активность печени зрелых и старых животных. Возможно, что такое действие МАФ связано с повышением дезинтоксикационная функция печени за счёт нейтрализации токсического эффекта СС14.

В литературе имеются многочисленные данные о положительных эффектах трансплантации органов, тканей и клеток, в том числе стволовых, в коррекции различных патологических процессов. В частности при применении изолированных гепатоцитов как при трансплантации, так и при временном экстракорпоральном их подключении к организму реципиента, показано их благоприятное воздействие, однако, возможность использования при этом гепатоцитов старых животных не изучалась. В связи с этим в следующей серии экспериментов мы исследовали влияние внутрибрюшинной трансплантации изолированных гепатоцитов (107 клеток старых животных) на репаративную регенерацию печени у зрелых и старых животных. Выявлено, что воздействие Тр после ЧГЭ у зрелых и старых животных приводило к значительной активации белково-синтетической (в 10 раз) и регенераторной (в 2 раза) функций печени, а также к активации эритропоэза (в 1,5-2 раза). Большая регенераторная активность (125%) и количество общего белка (115%) печени наблюдалось у старых животных.

Сочетание Тр с ЧГЭ и МАФ у обеих групп животных вызывает большее повышение активности дезинтоксикационной, регенераторной и дальнейшую активацию белково-синтетической функций печени.

Большая белково-синтетическая функция и количество общего белка печени наблюдается у старых животных, однако, при воздействии ЧГЭ на

Включение 3Н-тимидина в печень зрелых и старых животных при различных воздействиях

Иктактиые животные

СС14 +ЧГЭ*МАФ ЧГЭ*Тр*-МАФ

0 Зрелые животные Старые животные

Включение С14-углерода в печень зрелых и старых реципиентов при различных воздействиях

ЧГЭИ><-МАФ

1 б Зрелые животные

I г-, ^ ^ [

! Старые животные

токсически повреждённую ССЦ печень у обеих групп животных происходит угнетение белково-синтетической и регенераторной функции печени, более выраженное у старых животных. Последующее введение МАФ способствует активации данных функций, с преобладающим положительным эффектом у старых животных.

Таким образом, трансплантация клеток печени способна усиливать регенерационный потенциал и функциональную активность этого органа у животных-реципиентов с различным морфо-функциональным состоянием этого органа. Метаболически активные препараты усиливают положительный эффект трансплантации особенно при старении. Такой подход позволяет наметить перспективный путь коррекции в клинической практике тяжелых заболеваний печени особенно в зрелом и старческом возрасте.

Выводы.

1. Морфо-функциональное состояние интактной печени у зрелых и старых животных характеризуется одинаковыми значениями показателей клеточной пролиферации и высокой функциональной активностью её клеток. Введение МАФ не оказывает существенного влияния на эти процессы.

2. При частичной гепатэктомии активность регенераторных процессов существенно усиливается как у зрелых, так и старых животных, на фоне угнетения дезинтоксикационных процессов. МАФ стимулирует регенерацию и активирует белково-синтетическую функцию печени у обеих групп животных.

3. В условиях гепатотоксического воздействия ССЦ происходит значительное снижение пролиферативной активности печени как у зрелых, так и у старых животных. При этом введение ССЦ замедляет регенерацию печени при её частичной гепатэктомии, в обеих группах животных. Дополнительное введение МАФ восстанавливает регенерационный потенциал и функциональную активность печени, причём более выраженно у старых животных.

4. Трансплантация гепатоцитов старых животных существенно активирует белково-синтетическую и регенераторную функций печени в обеих группах, причём большая активация регенераторной функций печени наблюдается у старых животных. Такая закономерность сохраняется и при трансплантации гепатоцитов после ЧГЭ.

5 Трансплантация клеток печени старых животных способствует сохранению функциональной активности печени после введения ССЦ, однако у старых животных она менее выражена. Введение МАФ восстанавливает в этих условиях пролиферативный потенциал печени старых и зрелых животных.

6. Трансплантация клеток печени старых животных способна усилить пролиферативный потенциал в печени как зрелых, так и старых животных

при совместном проведении ЧГЭ и введении СС14. При этом введение МАФ усиливает результат этого феномена, активируя функцию клеток печени реципиента, создавая условия для реализации регенерационного потенциала донорских гепатоцитов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Возрастные особенности антиоксидантной активности и процессов перекисного окисления липидов в органах крыс в условиях стресса [Текст] / Д.Г.Близнец, В.С.Мельцов, А.Г.Солодовников, А.А.Реутов, Д.Г.Щербаков // Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения: Межвузовский сборник научных трудов. - Екатеринбург, 1999. - С.114-115.

2. Реутов A.A. Влияние тиопенталового наркоза на репаративную функцию печени у старых животных [Текст] / А.А.Реутов // Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения: Межвузовский сборник научных трудов. - Екатеринбург, 1999. - С.110.

3. Реутов A.A., Андреева О.Л. Функциональные особенности репаративных свойств печени у старых животных [Текст] / А.А.Реутов, О.Л.Андреева // Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения: Межвузовский сборник научных трудов. - Екатеринбург, 2000. - Выпуск 6. -4.1. - С.124-125.

4. Возрастные особенности перекисного окисления липидов и андиоксидантной системы при репаративной регенерации печени [Текст] / А.А.Реутов, Д.Г.Близнец, В.С.Мельцов, А.Г.Солодовников // Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения: Межвузовский сборник научных трудов. - Екатеринбург, 2000. - Выпуск 6. - 4.1. - С.126-127.

5. Реутов A.A. Влияние гексеналового сна на характер репарационных процессов в печени у старых животных [Текст] / А.А.Реутов // Геронтология, гериатрия и послевоенная медицина: Материалы межобластной научно-практической конференции. - Екатеринбург, 2000. - С.97-98.

6 Ястребов А.П., Реутов A.A. Сравнительная оценка влияния метаболически активных факторов на характер регенераторных процессов и функциональную активность печени зрелых и старых животных при частичной гепатэктомии после длительного воздействия этилового спирта

[Текст] / А.П.Ястребов, Л.А.Реутов // Геронтология, гериатрия и послевоенная медицина: Материалы межобластной научно-практической конференции. - Екатеринбург, 2000. - С.183-185.

7. Реутов A.A., Солодовников А.Г. Возрастные аспекты влияния метаболически активных факторов на функциональную активность регенерирующей печени повреждённую четырёххлористым углеродом [Текст] / А.А.Реутов, А.Г.Солодовников // Актуальные вопросы гериатрии. -СПб., 2001.-С.114.

8. Реутов A.A., Солодовников А.Г. Влияние комплекса метаболически активных факторов на функциональную характеристику репаративной регенерации печени после её резекции / Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения (Межвузовский сборник научных трудов). Екатеринбург, 2001. Вып.7.с. 191-192.

9. Ястребов А.П., Реутов A.A. Возрастные аспекты изменения функционального состояния печени при действии комплекса метаболически активных факторов [Текст] / А.П.Ястребов, А.А.Реутов // Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины. -Тюмень, 2001. - С.81-82.

10. Щербаков Д.Г., Реутов А А. Возрастные особенности влияния сочетания триптофана и никотиновой кислоты на перекисное окисление липидов и антиоксидантную активность при иммобилизационном стрессе [Текст] / Д.Г.Щербаков, А.А.Реутов // Геронтология, гериатрия и послевоенная медицина: Материалы межобластной научно-практической конференции. -Екатеринбург, 2002. - С.178-179.

11. Реутов А.А Влияние метаболически активных факторов на восстановительные процессы в печени у зрелых и старых животных с частичной гепатэктомией [Текст] / A.A.Реутов // Российский физиологический журнал им. И М.Сеченова - 2004. - Т.90. - № 8. - С.451

12 Ястребов А.П, Реутов A.A. Эффективность влияния метаболически активных факторов на функции печени у зрелых и старых животных с

частичной гепатэктомией и трансплантацией клеток старых животных. [Текст] / А.П.Ястребов, А. А Реутов // Вестн.Уральской государственной медицинской академии. - 2004. - Вьш.7. - С.47-48.

РЕУТОВ Андрей Александрович

Возрастные особенности репаративной регенерации печени при трансплантации гепатоцитов и действии метаболически активных факторов

РНБ Русский фонд

2006^ 824

Оглавление диссертации Реутов, Андрей Александрович :: 2004 :: Екатеринбург

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Реутов, Андрей Александрович, автореферат

Цели и задачи исследования.7

Научная новизна.8

Теоретическая и практическая значимость работы.9

Основные положения выносимые на защиту.9

Внедрение результатов исследования.-.Ю

Апробация работы и публикации.10

Объем и структура диссертации.И

Заключение диссертационного исследования на тему "Возрастные особенности репаративной регенерации печени при трансплантации гепатоцитов и действии метаболически активных факторов"

VII. Выводы

5. Трансплантация клеток печени старых животных способствует сохранению функциональной активности печени после введения ССЦ, однако у старых животных она менее выражена. Введение МАФ восстанавливает в этих условиях пролиферативный потенциал печени старых и зрелых животных.

6. Трансплантация клеток печени старых животных способна усилить пролиферативный потенциал в печени как зрелых, так и старых животных при совместном проведении ЧГЭ и введении СС14. При этом введение МАФ усиливает результат этого феномена, активируя функцию клеток печени реципиента, создавая условия для реализации регенерационного потенциала донорских гепатоцитов.

1.3. Заключение

Таким образом, в литературе накоплен достаточно большой материал о наличии высокого регенерационного потенциала печени здоровых животных, есть сведения о его значительной активизации при моделировании индуцированной регенерации после ЧГЭ и при её стимуляции пуриновыми и пиримидиновыми основаниями, цитокинами, циклическими нуклеотидами. Вместе с тем остаются малоисследованными особенности регенерации печени в разных возрастных группах, особенно при индуциации её частичной гепатэктомией, а также действию токсических факторов (например, ССЦ). Недостаточно изучена роль трансплантации гепатоцитов в регулировании восстановительных процессов. В литературе отсутствуют сведения об особенностях действия трансплантации гепатоцитов старых животных реципиентам различного возраста, с разной функциональной активностью печени. Нет данных о влиянии на взаимоотношение регенерирующей печени с трансплантацией гепатоцитов и коррекцией функциональных нарушений в ней метаболически активными факторами.

Знание этих закономерностей является актуальной задачей не только для Патофизиологии, но и для клинической практики. Именно это и определило цель и задачи настоящей работы.

Глава II

Материалы и методы исследования II.1. Объект исследования

Исследование проведено на 288 белых крысах линии «Вистар» Эксперименты выполнены на двух возрастных группах животных:

1. Зрелые животные (144) массой 305,0±15,3 грамм, возраст 1-1,2 года.

Схема эксперимента представлена в таблице 1.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2004 года, Реутов, Андрей Александрович

1. Активность ферментов в сыворотке крови и печени при экспериментальном циррозе печени на разных этапах его развития Текст. / Л.Л.Громашевская, З.П.Гетте, Я.М.Гусовский, В.Н.Демченко // Бюл.эксперим. биологии и медицины. 1968. -№ 11. - С.42-44.

2. Альтерация и внутриклеточная регенерация гепатоцитов, пораженных РНК-вирусов гепатита С Текст. / Г.И.Непомнящих, Н.П.Толоконская, J1.M.Непомнящих и др. // Бюл.эксперим. биологии и медицины. 1999. -Т. 127. - № 5. - С.583-587.

3. Альтшулер, P.A. К фармакологии 7-(оксиалкил)-замещенных теофиллина Текст. / Р.А.Альтшулер // Фармакология и токсикология. 1960. -T.XXIII. -№ 1. - С.29-30.

4. Анализ мембранных антигенов гепатоцитов в регенерирующей печени крыс Текст. / А.Н.Николаенко, С.И.Павлович, А.П.Иванов и др. // Воен.-мед.журн. 1992. - Вып. 64. - № 1. - С.29-35.

5. Арзяева, Е.Я. О методах изучения поражений печени вызываемых промышленными ядами Текст. / Е.Я.Арзяева // Гигиена и санитария. -М.: Медицина, 1966.-№ 3. С.24-28.

6. Арчаков, А.И. Микросомальное окисление Текст. / А.И.Арчаков. М., 1975.-327 с.

7. Баркова, Э.Н. Суточная динамика продолжительности гексеналового наркоза при экспериментальном гепатозе Текст. / Э.Н.Баркова, О.В.Гуров // Б.Э.Б. М., 1995. - № 5. - С.540.

8. Беляева, H.H. Пролиферация и полиплоидизация гепатоцитов как индикаторы регенерации печени после воздействия химических факторов Текст. / Н.Н.Беляева // Гигиена и санитария. 1989. -№ 3. - С.48-52.

9. Березов, Н.В. Пит-клетки тканевая форма крупных гранулоцитов с активностью естественных киллеров Текст. / Н.В.Березов // Арх.анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1991. - Т. 100. -№ 3. - С.5-15.

10. Блюгер, А.Ф. Основы гепатологии Текст. / А.Ф.Блюгер. Рига: изд-во «Звайгзне», 1975. -470 с.

11. Божков, А.И. Метаболизм липидов и особенности структурной активности мембраны эндоплазматического ретикулума в регенерирующей печени крыс Текст. / А.И.Божков, В.Л.Длюбовская // Биохимия. 1992. - Вып.57. - № 1. - С.8-15.

12. Вакулин, Г.М. Влияние оротата калия на обратимость цирротических изменений и регенерацию печени крыс Текст. / Г.М.Вакулин // Бюл.эксперим. биологии и медицины. 1998. - Т. 126. -№ 12. - С.687-692.

13. Вишневский, В.А. Функциональные и морфологические изменения и регенерация печени после ее резекции Текст. / В.А.Вишневский,

14. В.Д.Федоров, А.В.Подколзин// Хирургия. 1993. -№ 6. - С. 14-21.

15. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление с биологических мембранах Текст. / Ю.А.Владимиров, А.И.Арчаков. М., 1972. - 252 с.

16. Влияние беметила, этомерсола и яктона на регенерацию печени после частичной гепатэтокмии Текст. / В.В.Гайворонская, С.В.Оковитый, Е.В.Шустов, А.В.Сминров // Эксперим. и клинич.фармакология. — 2000. -Т.63. № 5. - С.34-36.

17. Влияние трансплантации эмбриональной ткани на репаративные процессы при экспериментальном циррозе печени Текст. / А.Н.Батанов,

18. Л.Ю.Эберт, П.Г.Димов, С.А.Пышкин // Бюл.эксперим. биологии и медицины. 2000. - Т.130. - № 8. - С.798-801.

19. Влияние церулоплазмина на пролиферацию гепатоцитов в регенерирующей печени крыс Текст. / Н.К.Бердинских, Л.А.Осипова, Д.Р.Король и др. // Цитология и генетика. 1990. - Вып.24. - № 5. - С.3-6.

20. Воронцова, М.А. Восстановление утраченных органов у животных и человека Текст. / М.А.Воронцова. М., 1953. - 210 с.

21. Воронцова, М.А. Физиологическая регенерация Текст. / М.А.Воронцова, Л.Д.Лиознер. М., 1955. - 180 с.

22. Вундер, В.П. Влияние тироидина и трийодтиронина в сочетании с теофиллином на регенерацию печени у крыс Текст. / В.П.Вундер // Бюл.эксперим. биологии и медицины. 1974. - Т.78. - № 8. - С.88-89.

23. Вундер, П.А. Влияние предварительного стресса на митотическую активность регенерирующей печени Текст. / П.А.Вундер, В.П.Вундер, Т.А.Андронова // Бюл.эксперим. биологии и медицины. 1976. - Т.82. -№ 10. - С.1254-1255.

24. Вундер, П.А. Стимуляция регенерации печени комбинированным назначением адреналина, глюкагона и теофиллина Текст. / П.А.Вундер, В.П.Вундер /У Бюл.эксперим. биологии и медицины. 1973. - Т.76. -№ 8. -С.109-111.

25. Гацура, В.В. Фармакологические агенты в экспериментальной медицине и биологии Текст. / В.В.Гацура, А.С.Саратиков. Томск, 1977. - 163 с.

26. Гликоген-синтезирующая функция гепатоцитов в цирротически измененной печени крыс, регенерирующей после частичной гепатэктомии Текст. / М.В.Кудрявцева, А.В.Емельянов, Г.А.Сакута и др. // Tissue Cell. -1998. Вып.30. - № 2. - С.261 -267.

27. Григорьев, Н.И. Реактивность эпителия тонкой кишки, желчного пузыря и печени позвоночных животных и человека Текст.: автореф.дис. канд.мед.наук / Н.И.Григорьев. Л., 1955. - 21 с.

28. Дробленков, A.B. Вставочные (базальные) эпителиоциты и регенерация эпителия желчных канальцев печени Текст. / А.В.Дробленков // Морфология. 1990 - Т. 111. - № 2. - С.88-93.

29. Дубовая, Т.К. Характеристика регенерации печени после ваготонии Текст. / Т.К.Дубовая, И.К.Елецкая, И.Б.Долышкова // Арх.анатомии, гистологии и эмбриологии. 1990. - Т.99. - № 7. - С.87-91.

30. Женевская, Р.П. Восстановительные процессы в печени позвоночных животных Текст. / Р.П.Женевская // Труды института морфологии животных им.Северцова. 1954. - Вып.11. - С.88.

31. Кашкевич, B.C. Состояние ДНК в быстро делящихся клетках Текст. / В.С.Кашкевич, Г.Д.Бердышев, Р.И.Салганик // Биохимия. 1966. - Т.31. - № 3. — С.548-555.

32. Кодолова, Г.И. О состоянии регенераторных процессов в печеночной ткани в условиях гипокинезии Текст.: автореф.дис.канд.биол.наук / Г.И.Кодолова. — Томск: Томск, гос. мед. ин-т, 1987. 19 с.

33. Колла, В.Э. Дозы лекарственных средств и химических соединений для лабораторных животных Текст. / В.Э.Колла, Б.Я.Сыропятов. — М., 1998. -214 с.

34. Крезацин экспериментальный стимулятор активности регенерирующих гепатоцитов Текст. / М.М.Расулов, И.Г.Кузнецов, A.A.Белоусов, М.Г.Воронкин//Докл. АН СССР. - 1990. - Вып.315. -№ 1. - С.246-248.

35. Куцый, М.П. Гидрокоризон и частичная гепатэктомия активируют связанные с гистонами протеиназы Текст. / М.П.Куцый, Д.Т.Закржевская,

36. A.И.Газиев // Биохимия. 1992. - Т.57. - № 10. - С. 1548-1553.

37. Лабораторные животные: разведение, содержание, использование в эксперименте Текст. / И.П.Западнюк, В.И.Западшок, Е.А.Захария, Б.В.Западшок. Киев: «Вища школа», 1983. - 198 с.

38. Лабораторные методы исследования в клинике Текст.: справочник /

39. B.В.Меньшиков, Л.Н.Делекторская, Р.П.Золотницкая и др.; под ред. В.В.Меньшикова. М.: «Медицина», 1987. - 368 с.

40. Лечение печёночной недостаточности методами трансплантации и экстракорпорального подключения печени и других тканей (биологические и клинические аспекты) Текст. / под. ред. акад.РАМН В.И.Шумакова, проф. Н.А.Онищенко. М., 1994. - 142 с.

41. Ли, С.Е. Влияние гипокинезии на репаративную регенерацию печени Текст. / С.Е.Ли // Бюл.эксперим. биологии и медицины. 1998. - Т. 125. -№ 2. - С.146-148.

42. Лиознер, Л.Д. Регенерация органов у млекопитающих Текст. / Л.Д.Лиознер. М., 1960. - 160 с.

43. Логинов, A.C. Звездчатые ретикуло-эндотелиоциты печени при хроническом гепатите Текст. / А.С.Логинов, Л.И.Аруин, О.Л.Шаталова // Арх.патологии. 1986. - Т.48. - № 5. - С.21 -25.

44. Лучшев, В.И. Состояние общей активности некоторых лизосомальных ферментов в ткани печени больных инфекционным гепатитом Текст.: автореф.дис.канд.мед.наук / В.И.Лучшев. М., 1970. - 19 с.

45. Маянский, Д.Н. Роль стромы печени в патогенезе гепатитов Текст. / Д.Н.Маянский // Вести.АМН СССР. 1988. -№ 5. - С.81-88.

46. Мейстер, В.А. Восстановление печеночной ткани после удаления целых долей печени до 4/5 общей массы органа Текст. / В.А.Мейстер. Киев, 1984.-176 с.

47. Методы биохимических исследований Текст. / под ред. проф. М.И.Прохоровои Л, 1982. - 379 с.

48. Модификация бромсульфалеиновой пробы для изучения функционального состояния печени у крыс Текст. / Л.И.Израйлет, В.Н.Соминский, Т.Н.Шибаева, В.Н.Слинъко // Гигиена и санитария. М.: «Медицина», 1976. - № 3. - С.59-61.

49. Морфологические эквиваленты лимфоцитарно-эгштелиальных взаимодействий при регенерации печени и почек Текст. / А.Г.Бабаева, В.А.Шахламов, В.И.Алтухова, Е.И.Гпммельфарб// Арх.патологии. 1998. -Т. 60. -№ 5. -С.58-61.

50. Клеточная и субклеточная патология печени Текст. / Т.Н.Копылова, А.Я.Майоре, Д.Л.Элерте и др. Рига, 1983. - 268 с.

51. Осипенко, A.B. Иммунобиологические механизмы регенерации тканей Текст. / А.В.Осипенко, В.А.Черешнев. Екатеринбург, 1997. - 130 с.

52. Осипенко, A.B. Энергетический обмен лимфоцитов при регенерации костной ткани Текст. / А.В.Осипенко, Э.Б.Макарова // Бюл.экспер.биологии и медицины. 1995. -№ 9. - С.310-312.

53. Острая ишемия органов и ранние постишемические расстройства Текст. / Материалы Всесоюзного симпозиума. М., 1978. - 230 с.

54. Панин, Л.Е. Влияние резидентных макрофагов на биосинтез белка в печени в условиях репаративной регенерации после частичнойгепатэктомии Текст. / Л.Е.Панин, М.В.Соколова, И.Ф.Усынин // Патол.физиология и эксперим.терапия. 1991. -№ 1. - С.20-22.

55. Панин, Л.Е. Лизосомы: роль в адаптации и восстановлении Текст. / Л.Е.Панин, Н.Н.Маянская. Новосибирск: изд-во «Наука», 1987. - С. 197.

56. Подвысоцкий, В.В. Возрождение печеночной ткани у млекопитающих животных Текст. / В.В.Подвысоцкий. Киев, 1886. - 123 с.

57. Проскурякова, И.С. Морфофункциональные аспекты регенерации печени при экспериментальной коррекции токсического гепатита Текст. / И.С.Проскурякова// Бюл.эксперим. биологии и медицины. 1995. - Т. 119. -№ 6. - С.656-659.

58. Репарация митохондриальных мембран гепатоцитов при использовании лнпосом с фосфатидилхолином Текст. / О.В.Добрынина, В.Л.Мигутина, С.З.Шатинина, А.В.Капитанов // Бюл.эксперим. биологии и медицины. -1991. Т. 112. — № 8. - С. 135-136.

59. Романова, Л.К. Регуляция восстановительных процессов Текст. / Л.К.Романова. — М.: изд-во Моск.университета, 1984. -209 с.

60. Савченко, Т.В. Топографическое, распределение пролиферирующих гепатоцитов в дольке печени интактных крыс на протяжении суток Текст. / Т.В.Савченко, Ю.А.Романов // Бюл.эксперим. биологии и медицины. -1989. № 2. - С.227.

61. Саркисов, Д.С. Приспособительные и компенсаторные процессы Текст. / Д.С.Саркисов, В.П.Туманов // Общая патология человека: руководстводля врачей; под ред. А.И.Струкова, В.В.Серова, Д.С.Саркисова. М.: Медицина, 1990. - С. 199-322.

62. Саркисов, Д.С. Регенерация в эволюционном аспекте Текст. / Д.С.Саркисов, В.Н.Галанкин//Арх.патологии. 1971.-Т.ЗЗ.-№ 10.-С.3-13.

63. Северин, М.В. Регенерация тканей при экстремальных воздействиях на организм Текст. / М.В.Северин, Б.Г.Юшков, А.П.Ястребов. -Екатеринбург: УрГМИ, 1993.- 177.

64. Секамова, С.М. Функциональная морфология печени Текст. / С.М.Секамова, Т.П.Бекетова // Морфологическая диагностика заболеваний печени; ред. В.В.Серов, К.М.Лапиш. М.: изд-во «Медицина», 1989. - С.8.

65. Сидорова, В.Ф. Печень Текст. / В.Ф.Сидорова, З.А.Рябинина // Регенерация органов у млекопитающих. М., 1960. - 199 с.

66. Солопаев, Б.П. Репаративная регенерация нормальной и патологически измененной печени млекопитающих Текст.: автореф.дис.д-ра мед.наук / Б.П.Солопаев. Горький, 1962. - 26 с.

67. Солопаева, И.М. Влияние хорионического гонадотропина на нормализацию липопероксидации Текст. / И.М.Солопаева, К.Н.Конторщикова // Бюл.эксперим. биологии и медицины. 1994. -Т. 117. - № 6. - С.572-573.

68. Стимуляция восстановительных процессов в печени при ее массивных поражениях и резекции Текст. / Э.И.Гальперин, С.Р.Карагюлян, ОЛО.Абакумова и др. // Хирургия. 1985. - № 4. - С.82-87.

69. Стимуляция регенеративных процессов и коррекция функциональной активности печени при ее частичной резекции и токсических повреждениях Текст. / О.И.Абакумова, Н.Г.Куценко, Л.М.Федорова и др. // Вестн.Рос.АМН. 1996. - № 5. - С.36-41.

70. Стимуляция регенераторных процессов в печени при острой печеночной недостаточности Текст. / К.Г.Кавтиашвили, Ю.А.Габуния, Т.О.Хундадзе и др. // Арх.патологии. 1990. - Т.52. - № 2. - С.47-52.

71. Структурно-функциональные характеристики фракций хроматина регенерирующей печени взрослых и старых крыс Текст. / Т.Г.Мозжухина, В.Н.Чабанный, И.Ю.Жилобок, А.Я.Литощенко // Вести.АМН СССР. 1990. -№ 1. - С.23.

72. Тугаринова, В.Н. Оценка функционального состояния печени с помощью нагрузки бромсульфалеином в санитарно-токсикологическом эксперименте Текст. / В.Н.Тугаринова, В.Е.Миклашевский // Гигиена и санитария. М.: Медицина, 1966. - № 11. - С.55-59.

73. Фактор, В.М. Ингибирование синтеза ДНК в гепатоцитах регенерирующей печени мышей уретаном Текст. / В.М.Фактор // Цитология. 1985.-Т.27.-№ 10. - С. 1145-1149.

74. Флогогенная и гемопоэз-стимулирующая активность макрофагов печени и легких в процессе регенерации печени Текст. / И.В.Плющ, Д.Д.Цырендорзиев, А.А.Зубахин, Д.Н.Маянский // Бюл.экспериментальной биологии и медицины. 1996. - Т. 122. - № 11.-С.494-498.

75. Формирование супероксидных радикалов в мембранах субклеточных органелл в регенерирующей печени Текст. / Л.С.Вартанян, И.П.Садовникова, С.М.Гуревич, И.С.Соколова // Биохимия. 1992. - Т.57. -№ 5. - С.671-678.

76. Харин, Г.М. Компенсаторно-восстановительные процессы в печени после